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冠状病毒染料法荧光定量通用RT-PCR试剂盒使用方法

2020/2/13提供者: 上海谷研实业有限公司 人气指数:60 进入该公司展台

冠状病毒染料法荧光定量通用RT-PCR试剂盒产品及特点
 
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
 
2. 根据人冠状病毒通用保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
 
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
 
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
 
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
 稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
 
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
 
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
 
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
 
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
 
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
 
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
 
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
人冠状病毒通用RT-PCR试剂盒使用方法:
样品 DNA 的制备
 
1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
 
2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
 
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
 
4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小)或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
 
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
 
6. 95℃保温 10 分钟。
 
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

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标签:ELISA试剂盒  

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