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提取心肌组织细胞内线粒体的方案

提供者:北京优尼康生物科技有限公司   发布时间:2019/11/27  阅读次数:30次   进入该公司展台

 提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:

       心肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,以9000 g离心20min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心20 min,弃上清得线粒体.全部操作于4 ℃进行。
培养细胞提取线粒体.细胞弃去培养液后,用细胞收集液作用2到3 min,用scraper,将细胞收集起来,6000 g离心15 min。弃上清,之后加细胞匀浆液,用匀浆器或手动匀浆管匀浆,将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机,以2500 rpm,离心15 min,缓缓取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中.以17000 rpm离心20 min,弃上清,留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖与0.003 mol/L氯化钙液l ml,用吸管吹打成悬液,以17000 rpm离心20 min,将上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:

       心肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,以9000 g离心20min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心20 min,弃上清得线粒体.全部操作于4 ℃进行。
培养细胞提取线粒体.细胞弃去培养液后,用细胞收集液作用2到3 min,用scraper,将细胞收集起来,6000 g离心15 min。弃上清,之后加细胞匀浆液,用匀浆器或手动匀浆管匀浆,将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机,以2500 rpm,离心15 min,缓缓取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中.以17000 rpm离心20 min,弃上清,留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖与0.003 mol/L氯化钙液l ml,用吸管吹打成悬液,以17000 rpm离心20 min,将上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。

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